App ID: FLM-S230001
GB 5009.35-2023
食品中合成著(zhù)色劑固相萃取及檢測
一、實(shí)驗目的
本研究按照 GB5009.35-2023 標準,利用固相萃取法作為樣品的前處理,建立了固相萃取-高效液相色譜法測定食品中合成著(zhù)色劑含量的方法, 樣品經(jīng)乙醇氨水提取后, 經(jīng) Polyclean X-WAX-S
150mg/6ml 小柱凈化, 采用高效液相色譜儀結合紫外檢測器測定。
二、實(shí)驗目標物
糖果等食品中合成著(zhù)色劑
三、應用范圍
糖果等食品中合成著(zhù)色劑的前處理與分析。
四、實(shí)驗材料
菲羅門(mén) Polyclean X-WAX-S 小柱, 150mg/6mL(貨號:9B-P008-06150)。
注:乙醇氨水溶液配制,量取無(wú)水乙醇 700 mL,加入 4 mL 氨水,用水稀釋并定容至 1 L,混勻。
五、實(shí)驗方法
1、樣品提取
準確稱(chēng)取樣品 2 g(精確至 0.001 g),置于 50 mL 具塞離心管中,加入 25 mL 乙醇氨水溶液(硬糖需要
先加入 2 mL 水超聲使其溶解),渦旋 1 min,50℃超聲提取 20 min,8000 轉/分鐘離心 5 min。
取上清液置于 50 mL 離心管中,殘渣中再加入 15 mL 乙醇氨水溶液重復提取 1 次,離心后合并上清液,
用乙醇氨水溶液定容至 50 mL,即得提取液。
準確吸取提取液 10 mL,50℃下氮氣濃縮至 2 mL 左右,分 2~3 次共加入 10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作為待凈化液。
2、SPE 柱凈化
先依次用 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化 Polyclean X-WAX-S 150mg/6ml 固相萃取柱,保持柱體濕潤,將待凈化液注入柱中,控制流出液流速在 1 滴/秒,棄去流出液。再依次用 6 mL 2%甲酸水和 6 mL 甲醇淋洗, 棄去淋洗液,抽干小柱。
最后用 6 mL 2%氨化甲醇洗脫,分兩次加入,收集洗脫液,于 50 ℃氮吹至近干。準確加入 2 mL pH=9 的乙酸銨溶液溶解,過(guò) 0.45 μm PTFE 濾膜,棄去 2~5 滴初濾液,取續濾液作為待測液。
3、HPLC 條件
色譜柱:菲羅門(mén) SuperLu C18(2) 5u 250*4.6mm(貨號:FMG-5292-EONU) 流動(dòng)相:A:20 mmol/L 乙酸銨溶液 B:甲醇
色譜方法:參照 GB 5009.35-2023 標準中一致的方法
六、實(shí)驗結果參考
七、注意事項
1)在使用乙醇氨水溶液提取時(shí),需要提取兩次以上,提取一次可能會(huì )導致提取不充分,導致回收率偏低。
2)過(guò) Polyclean X-WAX-S 小柱前確認樣液的 pH 值<6,以便于合成著(zhù)色劑目標化合物和填料更好的結合。
3)上機之前過(guò)濾所用的針式過(guò)濾器不能使用尼龍針式過(guò)濾器,會(huì )吸附部分合成著(zhù)色劑,導致回收率偏低, 建議使用 PTFE 水系針式過(guò)濾器。4)在檢測赤蘚紅時(shí),需要注意在使用離心管氮吹時(shí)會(huì )有少量的赤蘚紅會(huì )附著(zhù)在離心管上,可以采用渦旋和 超聲的方法進(jìn)行溶解,使用玻璃的氮吹管更易溶解;或者在溶解的時(shí)候加入一定量的甲醇便于赤蘚紅的溶解。